A rapid and reliable method for the clonal isolation of Acanthamoeba from environmental samples

Acanthamoeba are abundant in a wide range of environments, and some species are responsible for cutaneous infections, keratitis, and granulomatous amoebic encephalitis (GAE). The conventional detection and isolation of amoeba from clinical and environmental samples involves sampling and culture on non-nutrient Ágar medium. Although efficient, this system requires several transfers in order to eliminate contaminants, and is not appropriate for the isolation of individual amoeba from samples with a biodiverse community. In this study we propose an alternative method for the isolation of monocystic clones of Acanthamoeba. The propose method involves sampling, enrichment, encystment induction, and direct cysts micromanipulation and culture on Ágar plates.

Environmental analyses of the parasitic profile found in the sandy soil from the Santos municipality beaches, SP, Brazil / Análise ambiental do perfil de estruturas parasitárias encontradas no solo arenoso das praias do município de Santos, SP, Brasil

The environmental contamination by geohelminths represents a world public health problem and has been well documented by several authors. However, few papers describe the presence of such contamination in saline soils of coastal beaches. A study was performed on the beaches of the municipality of Santos in the period between May 2004 to April 2005 with the aim of determining the degree of contamination, and the correlation between contamination level and seasonal conditions and characteristics of the environment. Of the 2,520 samples analyzed, 18.2 percent (458) were contaminated, 32.3 percent (148) of which were localized in children's recreational areas (playgrounds). The parasite profile found in the analyzed samples indicated the presence of several zoonotic parasites: Ancylostoma larvae (82.5 percent), Toxocara sp. eggs (59.4 percent), Ancylostomidae-like eggs (37.1 percent), coccid oocysts (13.5 percent), Trichostrongylus sp. eggs and larvae, Ascaris lumbricoides eggs, (11.6 percent), Entamoeba sp. cysts (10.0 percent), Strongyloides sp. (4.8 percent), several free nematoids and some non-identified parasitic structures (3.3 percent). It was established that the highest frequency of parasitic structures occurred in the months between May and October 2004, and from February to March 2005. An increase in the diversity of parasitic forms was documented in the months between February to December 2004 and from January to April 2005, these periods having the highest rainfall.

A contaminação ambiental por geohelmintos representa um problema mundial de saúde pública e tem sido bem documentada por diversos autores. No entanto, poucos trabalhos descrevem a presença de contaminação em solos salinos de praias litorâneas. Este estudo foi realizado nas praias do município de Santos no período entre maio de 2004 a abril de 2005 com o objetivo de determinar o grau de contaminação, e possíveis correlações entre sazonalidade e características ambientais. Das 2.520 amostras analisadas, 18,2 por cento (458) estavam contaminadas, 32,3 por cento (148) das quais foram localizadas em areas de lazer das crianças(playgrounds). O perfil parasitário encontrado nas amostras analisadas indicaram a presença de vários parasitos com potencial zoonótico: larvas de Ancylostoma (82,5 por cento), ovos de Toxocara sp (59,4 por cento), ovos semelhantes aos de Ancilostomídeos (37,1 por cento), oocistos de coccídeos (13,5 por cento), ovos de Trichostrongylus sp., ovos de Ascaris lumbricoides, (11,6 por cento), cistos de Entamoeba sp. (10,0 por cento), Strongyloides sp. (4,8 por cento), vários nematóides de vida livre e algumas estruturas parasitárias não identificadas que podem corresponder a um parasita (3,3 por cento). Foi estabelecido que a maior frequência de estruturas parasitárias ocorreu nos meses entre maio e outubro de 2004, e de fevereiro a março de 2005. Um aumento na diversidade de formas parasitárias foi documentado nos meses entre fevereiro a dezembro de 2004 e de janeiro a abril de 2005, esses períodos com a maior pluviosidade.

Prevalence of potentially pathogenic free-living amoebae from Acanthamoeba and Naegleria genera in non-hospital, public, internal environments from the city of Santos, Brazil

Acanthamoeba and Naegleria species are free-living amoebae (FLA) found in a large variety of natural habitats. The prevalence of such amoebae was determined from dust samples taken from public non-hospital internal environments with good standards of cleanliness from two campuses of the same University in the city of Santos (SP), Brazil, and where young and apparently healthy people circulate. The frequency of free-living amoebae in both campuseswas 39 percent and 17 percent respectively, with predominance of the genus Acanthamoeba. On the campus with a much larger number of circulating individuals, the observed frequency of free-living amoebae was 2.29 times larger (P< 0.00005). Two trophozoite forms of Naegleria fowleri, are the only species of this genus known to cause primary amoebian meningoencephalitis, a rare and non-opportunistic infection. We assume that the high frequency of these organisms in different internal locations represents some kind of public health risk.

Comparison of PCR-based molecular markers for the characterization of Proteus mirabilis clinical isolates

Proteus mirabilis is one of the most important pathogens associated with complicated urinary tract infections (acute pyelonephritis, bladder infections, kidney stones) and bacteremia, affecting patients with anatomical abnormalities, immunodeficiency, and long-term urinary catheterization. For epidemiological purposes, various molecular typing methods, such as pulse-field gel electrophoresis (PFGE) or ribotyping, have been developed for this pathogen. However, these methods are labor intensive and time-consuming. We evaluated the discriminatory power of several PCR-based fingerprinting methods (RAPD, ISSR, ERIC-PCR, BOX-PCR and rep-PCR) for P. mirabilis clinical isolates. Typing patterns and clustering analysis indicated that RAPD, BOX-PCR and ERIC-PCR differentiated P. mirabilis strains from Escherichia coli, Hafnia alvei, and Morganella morganii. With the exception of rep-PCR, the methods gave medium to high discriminatory efficiency in P. mirabilis. In general, the results obtained with RAPD, BOX-PCR and ERIC-PCR were in good agreement. We concluded that a combination of ERIC-PCR and BOX-PCR results is a rapid and reliable alternative for discrimination among P. mirabilis clinical isolates, contributing to epidemiological studies.

Septicemia caused by Paracoccidioides brasiliensis (Lutz, 1908) as the cause of death of an aids patient from Santos, São Paulo State, Brazil - a nonendemic area

Relata-se o primeiro caso de Paracoccidioides brasiliensis, causando septicemia e morte em um paciente HIV positivo de 34 anos, do sexo feminino, natural e procedente de Santos, S.P.. A paciente apresentava-se com quadro febril inespecífico sendo que o diagnóstico só foi realizado pós morte da paciente através da positividade da hemocultura. Os autores chamam a atenção para a atipia do caso no que se refere ao fato de ser uma mulher em idade fértil e que nasceu e sempre residiu em Santos, área não endêmica para esta infecção.

Pathogenic factors and antimicrobial resistance of Staphylococcus epidermidis associated with nosocomial infections occurring in intensive care units

As infecções nosocomiais constituem um importante problema em hospitais, sendo que as unidades de terapia intensiva (UTI) apresentam a maior incidência deste tipo de infecções. Os estafilococos, especialmente S. epidermidis e S. aureus, estão entre os microrganismos mais importantes associados às infecções nosocomiais. S. epidermidis é uma espécie colonizante da pele, sendo frequentemente inoculado durante procedimentos invasivos ou veiculado pela equipe de saúde, e essa situação é agravada pela emergência de cepas multirresistentes endêmicas no ambiente hospitalar. No presente trabalho foi avaliada a resistência a antibióticos e presença de distintos fatores de patogenicidade em 98 isolados clínicos de S. epidermidis obtidos de vários materiais em unidades de terapia intensiva e 20 colonizantes de pele de voluntários saudáveis. Os resultados obtidos mostraram elevada freqüência de isolados clínicos multirresistentes a antibióticos (76,5 per center), enquanto esta não foi detectada em isolados de voluntários saudáveis. A frequência de isolados multiresistentes foi 67,7 per center na UTI neonatal, 66,6 per center na UTI pediátrica, e 60,8 per center na UTI adulto, a menor freqüência de isolados multirresistentes na UTI adulto é indicativo de maior incidência de cepas comunitárias nesse local. As diferenças significativas na freqüência de isolados com atividades hemolítica, proteolítica e formação de biofilme, encontradas entre isolados clínicos e controles, indica a maior incidência de cepas com potencial patogênico no ambiente hospitalar. Não foi observada correlação entre multirresistência e fatores de patogenicidade, exceto uma baixa correlação positiva com a atividade hemolítica.

Environmental straits of Cryptococcus neoformans variety grubii in the city of Santos, SP, Brazil

Analisaram-se 116 amostras, sendo 79 de fezes de pombos e 37 de ar atmosférico de regiões com acúmulo de fezes. Isolou-se Cryptococcus neoformans var. neoformans de 11 (13.9%) destas amostras. Outras espécies de Cryptococcus também foram isoladas destas amostras tais como C. laurentii (8.9%) e C. albidus (12.6 %), o qual também foi isolado de amostras do ar (5.4 %). Todas as amostras de C. neoformans foram sorotipo A (C. neoformans var. grubii). Em relação à avaliação do perfil de sensibilidade às drogas antifúngicas (5-fluorocitosina, fluconazol, itraconazol, anfotericina B e voriconazol) pelo método da microdiluição (EUCAST, 2002), destacou-se a presença de uma amostra com valor de concentração inibitória mínima (CIM) elevado para fluconazol, sendo de grande significância, uma vez tratar-se de isolado ambiental.

The effect of organic osmoprotectors on Aeromonas trota and A. hydrophila grown under high sodium chloride concentrations

O efeito de solutos orgânicos no crescimento de Aeromonas trota e A. hydrophila foi avaliado. A prolina e o ácido glutâmico não apresentaram efeito osmoprotetor, mas a betaina exerceu osmoproteção permitindo o crescimento de ambas bactérias em concentrações inibitórias de NaCl. A cinética do crescimento sugere que a diferença em halotolerância entre as linhagens está associada à síntese de osmolitos, mais do que à capacidade de acúmulo de betaina.

The effect of organic osmoprotectors on Aeromonas trota and A. hydrophila grown under high sodium chloride concentrations

The effect of organic solutes on the growth of Aeromonas trota and A. hydrophila was evaluated. Proline and glutamic acid were not effective as osmoprotectors, but betaine exerts osmoprotection allowing the growth of both strains in inhibitory concentrations of NaCl. Growth kinetics suggests that the halotolerance difference between the strains is associated with the synthesis of osmolytes rather than betaine uptake.

O efeito de solutos orgânicos no crescimento de Aeromonas trota e A. hydrophila foi avaliado. A prolina e o ácido glutâmico não apresentaram efeito osmoprotetor, mas a betaina exerceu osmoproteção permitindo o crescimento de ambas bactérias em concentrações inibitórias de NaCl. A cinética do crescimento sugere que a diferença em halotolerância entre as linhagens está associada à síntese de osmolitos, mais do que à capacidade de acúmulo de betaina.

Total protein electrophoresis and RAPD fingerprinting analysis for the identification of aeromonas at the species level

Fifteen well-defined strains of Aeromonas of thirteen species were analyzed by SDS protein electrophoretic analysis (SD-PAGE) and random amplified polymorphic DNA analysis (RAPD). The comparison between the patterns obtained by both methods allowed differentiating all the strains. Clusters formed by the unweighted pair group method with arithmetic averages applied to protein data correlates with the genetic and biochemical information about the species. The results show that protein fingerprinting has the potential to differentiate Aeromonas species, but the low qualitative variation indicates that this technique is not efficient of the characterization of strains within a species. Conversely, RAPD fingerprinting allows the identification of strains but the high variability limits its potential as an aiding method for species identification.

Avaliaçäo da atividade antimicrobiana de metabólitos produzidos pelo fungo Nomuraea rileyi (Farlow) samson / Antimicrobial activity evaluation of metabolits produced by the Nomuraea rileyi (Farlow) samson fungus

Metabólitos do fungo entomopatogênico Nomuraea rileyi produzidos em culturas submersas em caldo Sabouraud sacarose extrato de levedura foram extraídos com diclorometano. O extrato bruto foi fracionado por cromatografia em coluna e em camada espessa de fluxo contínuo utilizando benzeno-clorofórmio-acetato de etila 18:1:1 (v:v:v) como eluentes. Amostras de Saccharomyces cerevisiae e de bactérias (18 cepas hospitalares e 5 estirpes fitopatogênicas) foram testadas frente ao metabólito empregando-se o método de difusäo em ágar pelo sistema de discos (Kirby-Bauer). Aproximadamente (40 por cento) (9/23) das amostras bacterianas ensaiadas tiveram seu crescimento inibido na presença do metabólito produzido pelo fungo Nomuraea rileyi, sugerindo uma possível atividade antibacteriana deste metabólito